FITC標(biāo)記抗體七大流程：

　　流程一： 將待交聯(lián)的蛋白(濃度31mg/mL)對(duì)交聯(lián)反應(yīng)液透析三次4℃，至pH=9.0。交聯(lián)反應(yīng)液配制方法：7.56g NaHCO₃，1.06g Na₂CO₃，7.36g NaCl，加水定容至1 L。

　　流程二：將FITC溶于DMSO中，濃度為1mg/mL。每次交聯(lián)使用的FITC均應(yīng)新鮮配制，避光。

　　流程三： 按P:F(蛋白質(zhì):FITC)=1mg:150μg 的比例將FITC緩慢加入于抗體溶液中，邊加邊輕輕晃動(dòng)使其與抗體混合均勻，暗處4℃反應(yīng)8h。

　　流程四：加入5mol/L的NH4Cl至終濃度50mmol/L，4℃終止反應(yīng)2h。

　　流程五： 將交聯(lián)物在PBS中透析四次以上，至透析液清亮。

　　流程六：交聯(lián)物的鑒定

　　蛋白濃度(mg/mL) = [ A₂₈₀– 0.31×A₄₉₅ ] / 1.4

　　F/P比例: 3.1×A₄₉₅ / [A₂₈₀ – 0.31×A₄₉₅ ]，該值應(yīng)介于2.5～6.5之間。

　　流程七：FITC交聯(lián)的蛋白應(yīng)置于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中，加入0.1% NaN3、1% BSA，4℃避光保存。

來源：昀輝科技 http://milftug.com/